A sorologia (Imunofluorescência e ELISA) é extensamente utilizada no diagnóstico da LVC e em inquéritos epidemiológicos. Seus resultados baseiam-se na detecção de anticorpos antileishmania, não avaliando a carga parasitária, mas a resposta imunológica do animal contra o agente. Podem, portanto, acontecer resultados falso-negativos e falso-positivos. A melhor forma de aumentar a sensibilidade e a especificidade do diagnóstico é a realização de vários exames clínicos e laboratoriais, aumentando a assertividade do diagnóstico e evitando falhas.
O que fazer quando os resultados do ELISA e RIFI dão diferentes?
Em animais com resultados discordantes entre as metodologias, o mais indicado é considerar o conjunto de todos os métodos, isto é: o quadro clínico do animal, realizar o Exame Parasitológico Direto e/ou PCR, o hemograma, etc.
Como proceder em caso de sorologia negativa em animal com forte suspeita clínica?
É importante ressaltar que resultados negativos nestas metodologias (ELISA e RIFI) não devem ser usados como único método de diagnóstico confirmatório, pois esses testes detectam o agente, que pode estar ausente na amostra coletada (configurando o resultado falso-negativo). A recomendação é repetir a sorologia dentro de 1 a 3 meses. Deve-se ainda realizar o Exame Parasitológico Direto em punção de linfonodo ou medula óssea. Lembrar sempre que, nos exames que detectam o agente, resultados negativos não são confirmatórios.
E em caso de sorologia positiva em animal sem suspeita clínica?
A recomendação é a mesma: o acompanhamento clínico do animal e a realização de um exame mais específico, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e outros exames complementares.
Como avaliar resultados discordantes nos testes sorológicos?
Recomenda-se repetir o exame sorológico dentro de 1 a 3 meses e realizar exames mais específicos, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e outros complementares, como hemograma completo, creatinina, uréia, fosfatase alcalina, proteínas totais, albumina, globulina.
Como avaliar resultados indeterminados nos testes sorológicos?
O resultado indeterminado pode significar:
- Um resultado falso positivo, devido a razões biológicas (anticorpos inespecíficos/ reações cruzadas);
- Um resultado verdadeiro positivo, fruto de uma infecção adquirida recentemente (“janela imunológica”). Denomina-se "janela imunológica" o intervalo entre a infecção e a detecção de anticorpos por técnicas laboratoriais. Logo, resultados indeterminados devem se interpretados com cautela. Por isso, repito que o diagnóstico deve ser completo, com exames mais específicos, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e complementares (clínico e hemograma).
Como estabelecer condição sorológica antes da vacinação?
A recomendação é a realização de exames sorológicos, ELISA e RIFI. Deve-se lembrar que o animal pode estar na “janela imunológica”. Fazendo o diagnóstico completo que descartará a doença, a vacina é altamente indicada.
Por que o Governo utiliza dois métodos sorológicos na Leishmaniose?
O Ministério da Saúde padronizou dois métodos no diagnóstico– para aumentar a certeza do diagnóstico laboratorial, uma vez que se trata de doença grave e de uma zoonose. Um método sorológico (ELISA) complementa o outro (RIFI) em sensibilidade e em especificidade, a análise dos dois em conjunto é que vai nos dar um bom diagnóstico laboratorial.Mas ainda sim, no caso da Leishmaniose, não pode ser fonte única de investigação. O proprietário pode e DEVE recorrer a um laboratório de confiança para realização de ambos testes e a um médico veterinário para realizar o diagnóstico completo.
Quando tenho os dois métodos divergentes, isto quer dizer que a Sorologia/ Laboratório é ruim?
Não, temos de analisar cada método de forma separada e manter um estreito relacionamento com seu Laboratório de escolha para discutir os casos. Atualmente o método ELISA se encontra bastante específico e por vezes conflita com o método de RIFI, que está mais Sensível do que específico. Na RIFI dificilmente vai " passar " um cão reagente sem que seja diagnosticado.
Existe Reação cruzada?
Pode haver alguns animais reagentes na RIFI e Não reagentes ou Indeterminados ( Zona Cinza – perto do Cutoff do teste ) no ELISA, pois o excesso de sensibilidade da RIFI pode levar ( em títulos baixos - sempre até no máximo 1/80 ) a resultados que espelham uma Reação Cruzada com outras patologias, infecções e infestações. O melhor a fazer nestes casos é solicitar a Sorologia com Diluição Total para ver até que ponto está o titulo no exame de RIFI, caso esteja acima ou igual a 1/160 descarte reação cruzada – este cão tem Leishmaniose, mesmo se o ELISA tiver indeterminado - isto vai ser possível, pois o ELISA está menos sensível do que a RIFI. No caso de suspeita de reação cruzada a primeira coisa a fazer são os testes diagnósticos de patologias que podem levar a este quadro. Pesquise a presença de hemoparasitas, inclusive a presença de Tripanossoma. Não se esqueça de situações como Prenhez , Piometra, Dermatopatias crônicas, etc. Por isso é FUNDAMENTAL que os proprietários não aceitem de imediato os resultados obtidos nos inquéritos caninos do Governo. O diagnóstico da doença é algo difícil de precisar.
Deu um resultado Reagente no ELISA e Não reagente na RIFI o que pode ser?
Pode ser erro do laboratório ( geralmente pessoal mal treinado em RIFI ou com pouca experiência ) ou algum problema sério na conservação desta amostra – por exemplo, amostra hemolisada - repita o exame em outra amostra. Falso positivo no ELISA comercial em uso é muito raro. Discuta com o Veterinário para um diagnóstico completo, utilizando todas as técnicas possíveis.
Deu um resultado Reagente no RIFI e Não Reagente ou Indeterminado no ELISA o que pode ser?
- Pode ser Reação cruzada com outra patologia, pesquise as patologias que mais freqüentemente dão reação cruzada.
- Pode ser o início de uma soroconversão de animal infectado pois com a RIFI mais sensível do que o ELISA , nós podemos começar a ter Reagentes apenas no RIFI. Repita o exame após 30 dias – neste intervalo este animal será considerado suspeito , use coleira com Deltametrina + repelentes tópicos .
- Caso o título da RIFI seja 1/80 solicite diluição Total ao laboratório, caso venha maior ou igual a 1/160, descarte reação cruzada e considere este animal como Reagente.
* * Este resultado também pode ocorrer quando existe uma hemólise muito acentuada da amostra.
* * Animal em tratamento que consegue “negativar” o ELISA, mas mantém a RIFI com baixos títulos. Lembre-se que existem Proprietários administrando Alopurinol por conta própria e isto causa uma mudança total na interpretação dos resultados dos exames.
Sorologia com Diluição total, o que é isto?
O exame de Reação de IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA- RIFI é o exame sorológico que sai com títulos se der Reagente. Começando com 1/40- que consideramos um título baixo e na zona cinza da RIFI (o MS considera o suficiente para sacrifício), e indo até títulos como 1/1280 ou mais. Quanto maior o título da RIFI, pior o prognóstico, segundo a literatura científica. Portanto, saber em qual patamar, com qual título está o animal encaminhado, é muito importante. Títulos maiores ou iguais a 1/160 já afastam a possibilidade de ser uma reação cruzada, as reações cruzadas são quase sempre com títulos de 1/40 e até 1/80.
Como ficam os exames Sorológicos de animais vacinados?
Até o momento, a experiência com centenas de exames de animais vacinados com até quatro doses, nós observamos que aqueles cães que apresentaram sorologia Reagente estavam realmente infectados com a Leishmania. Ou seja, ao contrário do que se supunha a vacinação não parece tornar o animal soropositivo ao exame. Desta forma continua sendo válido solicitar a sorologia para o diagnóstico de doença mesmo em animal vacinado. Recomendamos solicitar o exame com a Diluição Total, pois quanto maior o título mais certo a chance de ser um animal infectado. Mas há controvérsias entre os veterinários.
Fontes: Blog de uma criadora que ama seus Frenchies
Artigos: Profilaxia da LVC
Artigos: Investigações em LVC
O que fazer quando os resultados do ELISA e RIFI dão diferentes?
Em animais com resultados discordantes entre as metodologias, o mais indicado é considerar o conjunto de todos os métodos, isto é: o quadro clínico do animal, realizar o Exame Parasitológico Direto e/ou PCR, o hemograma, etc.
Como proceder em caso de sorologia negativa em animal com forte suspeita clínica?
É importante ressaltar que resultados negativos nestas metodologias (ELISA e RIFI) não devem ser usados como único método de diagnóstico confirmatório, pois esses testes detectam o agente, que pode estar ausente na amostra coletada (configurando o resultado falso-negativo). A recomendação é repetir a sorologia dentro de 1 a 3 meses. Deve-se ainda realizar o Exame Parasitológico Direto em punção de linfonodo ou medula óssea. Lembrar sempre que, nos exames que detectam o agente, resultados negativos não são confirmatórios.
E em caso de sorologia positiva em animal sem suspeita clínica?
A recomendação é a mesma: o acompanhamento clínico do animal e a realização de um exame mais específico, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e outros exames complementares.
Como avaliar resultados discordantes nos testes sorológicos?
Recomenda-se repetir o exame sorológico dentro de 1 a 3 meses e realizar exames mais específicos, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e outros complementares, como hemograma completo, creatinina, uréia, fosfatase alcalina, proteínas totais, albumina, globulina.
Como avaliar resultados indeterminados nos testes sorológicos?
O resultado indeterminado pode significar:
- Um resultado falso positivo, devido a razões biológicas (anticorpos inespecíficos/ reações cruzadas);
- Um resultado verdadeiro positivo, fruto de uma infecção adquirida recentemente (“janela imunológica”). Denomina-se "janela imunológica" o intervalo entre a infecção e a detecção de anticorpos por técnicas laboratoriais. Logo, resultados indeterminados devem se interpretados com cautela. Por isso, repito que o diagnóstico deve ser completo, com exames mais específicos, como a PCR ou Exame Parasitológico Direto e complementares (clínico e hemograma).
Como estabelecer condição sorológica antes da vacinação?
A recomendação é a realização de exames sorológicos, ELISA e RIFI. Deve-se lembrar que o animal pode estar na “janela imunológica”. Fazendo o diagnóstico completo que descartará a doença, a vacina é altamente indicada.
Por que o Governo utiliza dois métodos sorológicos na Leishmaniose?
O Ministério da Saúde padronizou dois métodos no diagnóstico– para aumentar a certeza do diagnóstico laboratorial, uma vez que se trata de doença grave e de uma zoonose. Um método sorológico (ELISA) complementa o outro (RIFI) em sensibilidade e em especificidade, a análise dos dois em conjunto é que vai nos dar um bom diagnóstico laboratorial.Mas ainda sim, no caso da Leishmaniose, não pode ser fonte única de investigação. O proprietário pode e DEVE recorrer a um laboratório de confiança para realização de ambos testes e a um médico veterinário para realizar o diagnóstico completo.
Quando tenho os dois métodos divergentes, isto quer dizer que a Sorologia/ Laboratório é ruim?
Não, temos de analisar cada método de forma separada e manter um estreito relacionamento com seu Laboratório de escolha para discutir os casos. Atualmente o método ELISA se encontra bastante específico e por vezes conflita com o método de RIFI, que está mais Sensível do que específico. Na RIFI dificilmente vai " passar " um cão reagente sem que seja diagnosticado.
Existe Reação cruzada?
Pode haver alguns animais reagentes na RIFI e Não reagentes ou Indeterminados ( Zona Cinza – perto do Cutoff do teste ) no ELISA, pois o excesso de sensibilidade da RIFI pode levar ( em títulos baixos - sempre até no máximo 1/80 ) a resultados que espelham uma Reação Cruzada com outras patologias, infecções e infestações. O melhor a fazer nestes casos é solicitar a Sorologia com Diluição Total para ver até que ponto está o titulo no exame de RIFI, caso esteja acima ou igual a 1/160 descarte reação cruzada – este cão tem Leishmaniose, mesmo se o ELISA tiver indeterminado - isto vai ser possível, pois o ELISA está menos sensível do que a RIFI. No caso de suspeita de reação cruzada a primeira coisa a fazer são os testes diagnósticos de patologias que podem levar a este quadro. Pesquise a presença de hemoparasitas, inclusive a presença de Tripanossoma. Não se esqueça de situações como Prenhez , Piometra, Dermatopatias crônicas, etc. Por isso é FUNDAMENTAL que os proprietários não aceitem de imediato os resultados obtidos nos inquéritos caninos do Governo. O diagnóstico da doença é algo difícil de precisar.
Deu um resultado Reagente no ELISA e Não reagente na RIFI o que pode ser?
Pode ser erro do laboratório ( geralmente pessoal mal treinado em RIFI ou com pouca experiência ) ou algum problema sério na conservação desta amostra – por exemplo, amostra hemolisada - repita o exame em outra amostra. Falso positivo no ELISA comercial em uso é muito raro. Discuta com o Veterinário para um diagnóstico completo, utilizando todas as técnicas possíveis.
Deu um resultado Reagente no RIFI e Não Reagente ou Indeterminado no ELISA o que pode ser?
- Pode ser Reação cruzada com outra patologia, pesquise as patologias que mais freqüentemente dão reação cruzada.
- Pode ser o início de uma soroconversão de animal infectado pois com a RIFI mais sensível do que o ELISA , nós podemos começar a ter Reagentes apenas no RIFI. Repita o exame após 30 dias – neste intervalo este animal será considerado suspeito , use coleira com Deltametrina + repelentes tópicos .
- Caso o título da RIFI seja 1/80 solicite diluição Total ao laboratório, caso venha maior ou igual a 1/160, descarte reação cruzada e considere este animal como Reagente.
* * Este resultado também pode ocorrer quando existe uma hemólise muito acentuada da amostra.
* * Animal em tratamento que consegue “negativar” o ELISA, mas mantém a RIFI com baixos títulos. Lembre-se que existem Proprietários administrando Alopurinol por conta própria e isto causa uma mudança total na interpretação dos resultados dos exames.
Sorologia com Diluição total, o que é isto?
O exame de Reação de IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA- RIFI é o exame sorológico que sai com títulos se der Reagente. Começando com 1/40- que consideramos um título baixo e na zona cinza da RIFI (o MS considera o suficiente para sacrifício), e indo até títulos como 1/1280 ou mais. Quanto maior o título da RIFI, pior o prognóstico, segundo a literatura científica. Portanto, saber em qual patamar, com qual título está o animal encaminhado, é muito importante. Títulos maiores ou iguais a 1/160 já afastam a possibilidade de ser uma reação cruzada, as reações cruzadas são quase sempre com títulos de 1/40 e até 1/80.
Como ficam os exames Sorológicos de animais vacinados?
Até o momento, a experiência com centenas de exames de animais vacinados com até quatro doses, nós observamos que aqueles cães que apresentaram sorologia Reagente estavam realmente infectados com a Leishmania. Ou seja, ao contrário do que se supunha a vacinação não parece tornar o animal soropositivo ao exame. Desta forma continua sendo válido solicitar a sorologia para o diagnóstico de doença mesmo em animal vacinado. Recomendamos solicitar o exame com a Diluição Total, pois quanto maior o título mais certo a chance de ser um animal infectado. Mas há controvérsias entre os veterinários.
Fontes: Blog de uma criadora que ama seus Frenchies
Artigos: Profilaxia da LVC
Artigos: Investigações em LVC
1 comentários:
E quando da os dois reagentes oque eu faço ?
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